常用溶液配制
?磷酸鹽緩沖液(PBS) 將8g氯化鈉、0.2g氯化鉀、1.44g磷酸氫二鈉和0.24g磷酸二氫鉀溶解于800ml蒸餾水中,用鹽酸調(diào)pH至7.4,加蒸餾水定容至1000ml,分裝,高壓滅菌,室溫保存。
?0.5mol/L EDTA 將186.1g EDTA·2Na·2H2O溶解于蒸餾水中,用NaOH調(diào)節(jié)溶解pH至8.0,加雙蒸水定容至1000ml,分裝,高壓滅菌,室溫保存。
?裂解液氯化氨8.29g、碳酸氫鉀1.10g、EDTA·2Na 0.029g、雙蒸水加至1000ml,用0.22um濾膜過(guò)濾,4度保存。
?4%固定緩沖液(儲(chǔ)備液)4.0g多聚甲醛,加新鮮配置的PBS至100ml,加熱到56度溶解,完全溶解后,用濾紙過(guò)濾,再用0.22um濾膜過(guò)濾,-20度冰凍保存。
?1%固定緩沖液(應(yīng)用液)將4%固定緩沖液解凍后,用新鮮配置的PBS稀釋成1%,充分混勻,1個(gè)月內(nèi)用完。
?破膜劑 將0.1g皂素、0.1gNaN3及1.0g牛血清白蛋白溶解于100mlPBS(pH7.4)中。4度保存。無(wú)牛血清白蛋白時(shí),可加入1%體積的小牛血清代替。
?Hanks液 配方如下:
1.原液A NaCl 160g,MgSO4·7H2O 2g,KCl 8g,MgCl2·6H2O2g,CaCl2 2.8g,溶于1000ml雙蒸水。
2.原液B (1)Na2HPO4·12H2O3.04g,KH2PO4 1.2g,葡萄糖20.0g,溶于800ml雙蒸水。 (2)0.4%酚紅溶液:取酚紅0.4g,置玻璃研缽中,逐滴加入0.1N NaOH并研磨,直至完全溶解,約加0.1N NaOH 10ml。將溶解的酚紅吸入100ml量瓶中,用雙蒸水洗去研缽中殘留酚紅液,并入量瓶中,最后補(bǔ)加雙蒸水至100 ml。 將(1)和(2)混合,補(bǔ)加雙蒸水至1000ml。即為原液B。
3.應(yīng)用液 原液A 1份,原液B 1份,雙蒸水18份,混合后,分裝于200ml小瓶中,0.1MPa高壓蒸汽滅菌15分鐘,臨用前用無(wú)菌的5.3%
NaHCO3調(diào)pH至7.2~7.6。