多因子檢測(cè)樣本的收集和處理
正確的樣本收集整理方法,是實(shí)驗(yàn)成功至關(guān)重要的步驟。目前可以檢測(cè)樣本類(lèi)型有: 細(xì)胞上清、血清、血漿。盡管其他生物學(xué)樣本沒(méi)有經(jīng)過(guò)驗(yàn)證,但是理論上也可以檢測(cè),這些樣本包括: BAL,唾液,CSF,組織勻漿液和尿液。
下面我們針對(duì)幾種常見(jiàn)樣本的收集、保存方法:
1、血清
全血室溫(20-25 °C)凝固20-30min;
室溫1,000 x g 10min;
收集上清,或者選擇使用血清分離器;
可選:如果樣本是高血脂樣本,請(qǐng)先在2-8℃10,000 x g 離心 10min,分離出下層血清;
多因子檢測(cè)血清樣本要求新鮮;如果不能在24h內(nèi)檢測(cè),需要分裝在-80 ℃保存,避免反復(fù)凍融。
2、血漿
根據(jù)要求選擇檸檬酸或EDTA作為抗凝劑。如果選擇肝素作為抗凝劑,建議每毫升血不超過(guò)10IU肝素(肝素用量過(guò)高,可能會(huì)導(dǎo)致部分檢測(cè)指標(biāo)值偏高)。
收集抗凝全血后30min內(nèi),在4℃下10,000 x g離心10min,分離收集血漿;
可選:如果樣本是高血脂樣本,請(qǐng)先在2-8℃10,000 x g 離心 10min,分離出下層血漿;
多因子檢測(cè)血漿樣本要求新鮮;如果不能在24h內(nèi)檢測(cè),需要分裝在-80 ℃保存,避免反復(fù)凍融。
3、細(xì)胞培養(yǎng)上清
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),最好用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
4、組織樣本
如果可以,請(qǐng)按照參考文獻(xiàn)推薦的方法。標(biāo)本取完后液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的含有蛋白酶抑制劑的緩沖液, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
保存過(guò)程中如果有沉淀,檢測(cè)前樣本應(yīng)該再次離心去除沉淀,建議16,000 x g 離心5min。