原理：

碘化丙啶(Propidium ，簡稱PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。

操作步驟：

1、對于懸浮細(xì)胞，直接離心收集細(xì)胞，棄上清，在4 ℃、1200rmp下用預(yù)冷的PBS洗細(xì)胞兩次；對于貼壁細(xì)胞，先用不含EDTA的0.25%的胰酶消化再離心收集細(xì)胞；

2、加入預(yù)冷的70%乙醇（PBS配制），于4℃固定過夜，或-20℃長期固定；

3、離心收集細(xì)胞，以1 mL預(yù)冷的PBS洗細(xì)胞一次，加入預(yù)冷的 PBS重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1.0×106，取出100 ul細(xì)胞懸液，加入RNase A酶，使RNase A終濃度為1 mg/ml，混勻后37 ℃水浴30 min；

4、加入PI綜合染色液，使PI終濃度為50 ug/mL，混勻，4℃冰箱避光保存；

5、300目尼龍網(wǎng)過濾后，上機(jī)檢測。

注意事項：

1、細(xì)胞濃度一定要≧1×106/ml，特別是陰性對照管細(xì)胞量要大一些，以便樣品電壓調(diào)節(jié)；

2、必須保證被檢測樣品為單細(xì)胞懸液；

3、如果樣品細(xì)胞為培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞，將上清轉(zhuǎn)入離心管（其中含有脫落的凋亡細(xì)胞），與不含EDTA的胰酶消化的細(xì)胞合并后離心收集細(xì)胞；

4、在細(xì)胞固定時一定要將細(xì)胞吹開，吹成單細(xì)胞懸液；

5、RNAse與PI綜合染液分開的原因是RNAse的作用最適溫度是37℃，而不是4℃，所以與教材有所不同；

6、PI綜合染液不能用蒸餾水配，否則細(xì)胞全部溶解，造成結(jié)果不可靠；

7、4℃過夜一般隔天就進(jìn)行檢測，如果想推遲幾天測，那就保存在-20℃，有資料顯示-20℃可以至少保存一個月；

8、70%~75%的酒精都可以用于PI單染固定。