1、材料

L-929 細胞系（ATCC Cat# CCL-1）

培養(yǎng)基：RPMI1640+10%FBS。

檢測培養(yǎng)基：RPMI1640+2%FBS。

96孔板（平底）（Costar Cat.No.3595）

放線菌素D，500ug/ml 等分-80度凍存（避光）。

MTT溶液：（Sigma Cat. No. M5655）5mg/ml 儲液（PBS稀釋），室溫避光保存。

MTT裂解液：20%SDS或50%DMF。

2、儀器

吸管和移液器

恒濕培養(yǎng)箱

96孔微孔檢測分光光度計

3、持續(xù)時間

孵育時間48小時（見速查表）

測定樣品準備時間1小時

4、實驗步驟

(1) 使用檢測培養(yǎng)基制備L929懸液，調(diào)整細胞濃度為3.5×105/ml，每孔加100ul細胞懸液。37度 5%CO2 恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

(2) 另一塊稀釋板中每孔加50ul檢測培養(yǎng)基。

(3) 使用兩倍的連續(xù)稀釋液從第3排到第12排依次稀釋功能級別的抗細胞因子抗體（見速查表標準范圍），留1,2排不加。

(4) 2排到12排每孔加50ul重組細胞因子和樣品（濃度見速查表，第二排是細胞因子和指示細胞組），1排是只有細胞的對照組。

(5) 37度 5%CO2 恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)2小時。

(6) 將50ul的抗原抗體混合液加到包含細胞的對應孔中。

(7) 用檢測培養(yǎng)基稀釋放射菌素D儲液為4ug/ml的工作液，每孔加50ul工作液。

(8) 37度 5%CO2 恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時。

(9) 每孔加10ul MTT溶液（5mg/ml），孵育4小時。

(10)每孔加50ul MTT 裂解液，孵育過夜。

(11)570-650nm 讀板。

(12)繪制標準曲線分析數(shù)據(jù)。