1、材料

指示細(xì)胞系（見(jiàn)速查表針對(duì)給定的細(xì)胞因子）

培養(yǎng)基：RPMI1640+10%FBS。

96孔板（平底）（Costar Cat.No.3595）

細(xì)胞因子ELISA配對(duì)或ready-set-go kit

2、儀器

吸管和移液器

恒濕培養(yǎng)箱

96孔微孔檢測(cè)分光光度計(jì)

3、持續(xù)時(shí)間

孵育時(shí)間24-48小時(shí)

測(cè)定樣品準(zhǔn)備時(shí)間1小時(shí)

4、實(shí)驗(yàn)步驟

（1）向96孔板每孔中加50ul培養(yǎng)基1640.

（2）使用兩倍的連續(xù)稀釋液從第3排到第12排依次稀釋功能級(jí)別的抗細(xì)胞因子抗體（見(jiàn)速查表標(biāo)準(zhǔn)范圍），留1,2排不加。

（3）2排到12排每孔加50ul重組細(xì)胞因子和樣品（濃度見(jiàn)速查表，第二排是細(xì)胞因子和指示細(xì)胞組，1排是只有細(xì)胞的對(duì)照組）。

（4）1640培養(yǎng)基洗指示細(xì)胞三次，重懸調(diào)整細(xì)胞濃度到2-3.5×105/ml（見(jiàn)速查表）。

（5）每孔加100ul細(xì)胞懸液。

（6）37度 5%CO2 恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-48小時(shí)。

（7）收獲上清ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子。

（8）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線分析數(shù)據(jù)。

細(xì)胞因子檢測(cè)速查指南表（human and mouse）：