1、材料

指示細胞系：見速查表。

培養(yǎng)基：RPMI1640+10%FBS。

檢測培養(yǎng)基：RPMI1640+2%FBS。

96孔板（平底）（Costar Cat.No.3595）

MTT溶液：（Sigma Cat. No. M5655）5mg/ml 儲液（PBS稀釋），室溫避光保存。

MTT裂解液：20%SDS或50%DMF。

2、儀器

吸管和移液器

恒濕培養(yǎng)箱

96孔微孔檢測分光光度計

3、實驗持續(xù)時間

孵育時間24-48小時

測定樣品準備時間1小時

4、實驗方案

（1）向96孔板每孔中加50ul檢測培養(yǎng)基。

（2）使用兩倍的連續(xù)稀釋液從第3排到第12排依次稀釋功能級別的抗細胞因子抗體，留1和2排不加，作為對照。

（3）2排到12排每孔加50ul重組細胞因子和樣品（濃度見速查表，第二排是細胞因子和指示細胞組），1排是只有細胞的對照組。

（4）37度 5%CO2 恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)2小時。

（5）1640培養(yǎng)基洗指示細胞三次，檢測培養(yǎng)基重懸調(diào)整細胞濃度到2-3.5×105/ml（見速查表）。

（6）每孔加100ul細胞懸液。

（7）37度 5%CO2 恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-48小時。

（8）每孔加10ul MTT溶液（5mg/ml），孵育4小時。

（9）每孔加50ul MTT 裂解液，孵育過夜。

（10）570-650nm 讀板。

（11）繪制標準曲線分析數(shù)據(jù)。