FlowCytomix常見問題
1. 標(biāo)準(zhǔn)品注意事項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備:
在開始之前離心標(biāo)準(zhǔn)品管;標(biāo)準(zhǔn)品的建立:不要用稀釋12個(gè)小時(shí)后的標(biāo)準(zhǔn)品,每個(gè)實(shí)驗(yàn)都要用新鮮的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋品;嚴(yán)格按照說明書操作,微珠的量不精確會影響實(shí)驗(yàn)的敏感性; FlowCytomix是用PE熒光標(biāo)記的,在加入指示試劑之后所有步驟都要避光,以獲得最大熒光信號。
2. 什么是血清血漿的能夠檢測到的可靠的最低值:
血清或血漿中的細(xì)胞因子經(jīng)常會低于常規(guī)免疫檢測的水平,這是由于大多數(shù)細(xì)胞因子僅僅在自身周圍具有較高的免疫活性,而且多數(shù)情況下,具有半衰期。因此,可以合理的假定,僅僅在出現(xiàn)病理變化的時(shí)候細(xì)胞因子才會在全身的血清和血漿中檢測出較高的數(shù)量。對于趨化因子和生長因子可能產(chǎn)生較高的水平和較長的半衰期,因此更容易被檢到。
3. 同一樣品Flow cytomix與ELISA所得結(jié)果不同:
熒光報(bào)告系統(tǒng)比ELISA具有更多的優(yōu)勢,比如動態(tài)范圍更大。由于復(fù)雜性和珠為基礎(chǔ)的動力學(xué)分析,用ELISA所得的定量結(jié)果可能與Flow cytomix 所得的不同。因此,只與所得值正相關(guān),而不是比較ELISA和Flow cytomix的絕對值。
4.Flow cytomix實(shí)驗(yàn)之前注意事項(xiàng):
<1> 混和在準(zhǔn)備珠子混和物的時(shí)候,吸出的珠子直接加到管子的底部,以免珠子留在管壁有損失?;旌蜆?biāo)準(zhǔn)品或樣品的時(shí)候馬上渦旋珠子,在把試管放到流式細(xì)胞儀之前每個(gè)樣品再次渦旋3-5秒,這樣可以更好的在FL3/FL4通道區(qū)分珠子的種類。
<2> 避免雙倍的珠子數(shù)目在把珠子的溶液加到測定板上的時(shí)候,把珠子加到孔中的標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的溶液中,確保不要粘附到孔的邊上。
<3> 堵塞過濾板:血清或血漿樣品在洗滌過程中可能堵塞過濾板,如果發(fā)生這種情況,小心的推動通過板孔的針。