免疫組織化學（IHC）實驗免疫染色詳細流程
IHC實驗是一種常用的免疫組織化學技術，廣泛應用于醫(yī)學、生物學和生物技術領域。該實驗的主要目的是通過檢測組織或細胞中的特定蛋白質，以了解其功能、定位和表達情況。
IHC實驗是一種常用的免疫組織化學技術，可以用于檢測蛋白質在組織中的表達和定位。這期主要講解的是IHC實驗中抗原修復、封閉、一抗孵育、二抗孵育、檢測的詳細步驟以及操作過程:
一、抗原修復
1. 將組織切片置于二甲苯中脫蠟10分鐘，然后用PBS洗去二甲苯。
2. 用EDTA抗原修復液（pH9.0）在微波爐上加熱至沸騰后，將切片放入修復液中，保持沸騰狀態(tài)20分鐘?；蛘哂肨ris-EDTA抗原修復液（pH9.0）在電爐上加熱至近沸騰后，將切片放入修復液中，保持沸騰狀態(tài)10-20分鐘。
3. 用冷水將切片冷卻至室溫，然后用PBS洗去抗原修復液。
二、封閉
1. 加入足夠量的正常羊血清或牛血清蛋白溶液，覆蓋組織切片并封閉其中的未結合位點。
2. 將切片在濕盒中孵育30分鐘，使血清與組織充分作用。
3. 用PBS洗去未結合的血清，然后進行一抗孵育。
三、一抗孵育
1. 根據實驗需求選擇適當?shù)囊豢?，稀釋適當倍數(shù)后加入切片中，覆蓋組織并封閉其中的位點。
2. 將切片在濕盒中孵育1-2小時，使一抗與組織充分作用。
3. 用PBS洗去未結合的一抗，然后進行二抗孵育。
四、二抗孵育
1. 根據實驗需求選擇適當?shù)亩?，稀釋適當倍數(shù)后加入切片中，覆蓋組織并封閉其中的一抗。
2. 將切片在濕盒中孵育1-2小時，使二抗與組織充分作用。
3. 用PBS洗去未結合的二抗，然后進行檢測。
五、檢測
1. 根據實驗需求選擇適當?shù)臋z測方法，如DAB染色、熒光染色等。
2. 根據檢測方法加入適當?shù)脑噭?，如DAB顯色液、熒光染料等。
3. 在適當?shù)臈l件下進行檢測，觀察組織的染色情況并記錄結果。可以使用熒光顯微鏡、光學顯微鏡或掃描儀等設備來觀察組織切片的染色情況。如果使用熒光顯微鏡，可以觀察到熒光標記的二抗發(fā)出的熒光信號；如果使用光學顯微鏡，可以觀察到染色的組織切片中的目標蛋白質。
注意事項：IHC實驗的每個步驟都需要嚴格按照規(guī)定進行操作，以保證實驗結果的準確性和可靠性。同時，實驗過程中需要注意安全問題，如避免接觸化學物質等。
熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) ：熒光顯微鏡是以紫外線為光源， 用以照射被檢物體， 使之發(fā)出熒光， 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。
熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。
