Taitool神經(jīng)元跨突觸順標方案
1、WGA-Cre
wheat-germ agglutinin 小麥凝集素蛋白,在神經(jīng)元中表達后有跨突觸的能力。偶聯(lián)Cre蛋白的WGA,會攜帶Cre同時跨突觸從而標記上下游神經(jīng)元。
優(yōu)點:可實現(xiàn)細胞特異上下游標記。
缺點:在一些環(huán)路中效果不佳,上下游均有可能標記。
實驗方案:
在上游注射WGA-Cre病毒(滴度3E+12VG/mL,體積200nl左右),下游注射DIO-GOI病毒(一般用血清型9型,滴度3E+12VG/mL,體積200nl左右)
2、AAV1
1型腺相關(guān)病毒有一定的向下游標記的能力,雖然這種能力較弱,但足以表達一定量的Cre等重組酶,誘導(dǎo)下游基因的表達。
優(yōu)點:效率較高,目前用過的實驗室基本都認可它的順向標記能力。
缺點:表達較弱,只能用于表達重組酶,由于要求病毒滴度較高,注射區(qū)域有一定毒性。目前使用的規(guī)模還較小,不清楚是否所有環(huán)路都適用。
實驗方案:在上游注射AAV1(滴度0.7~1.5E+13VG/mL,體積200nl左右),下游注射DIO-GOI病毒(一般用血清型9型,滴度3E+12VG/mL,體積200nl左右)
3、scAAV1 (泰兒圖獨有,合作文章在發(fā)表中)
scAAV是self-complementary AAV的縮寫,它是一種自互補的AAV,由于它的基因組本身就是雙鏈的,所以它的表達時間更快,效率更高。
優(yōu)點:能夠在下游直接表達熒光基團等功能基因。
缺點:載體容量小,滴度低(一般大于5E+12VG/mL)。
實驗方案1:在上游注射scAAV1(滴度3E+12VG/mL,體積200nl左右),下游注射DIO-GOI病毒(一般用血清型9型,滴度3E+12VG/mL,體積200nl左右)。
實驗方案2:在上游注射scAAV1(滴度3E+12VG/mL,體積200nl左右),下游直接觀察或者注射Cre,誘導(dǎo)scAAV1攜帶的DIO-GOI表達。
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