納米晶體標(biāo)記細(xì)胞及活體成像參考實驗方法

一 實驗材料

(1) 細(xì)胞及完全培養(yǎng)基

(2) 8 孔 BD Falcon Culture Slides (cat. 354118)

(3) Reactive eFluor? Nanocrystals - InGaP Composition

(4) 0.2 μm 注射式濾器或其他無菌濾器

(5) 1CC胰島素注射器29 X 1/2-gauge（靜脈注射用）

(6) 裸鼠等動物模型

(7) 熒光成像系統(tǒng)

二 實驗步驟

細(xì)胞傳代

(1) 從75cm2的培養(yǎng)瓶中傳代細(xì)胞至BD Falcon Culture Slides，每孔密度為2萬細(xì)胞（細(xì)胞密度隨著使用培養(yǎng)板不同而不同）。

(2) 37度，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞24-48小時，使細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)板。

標(biāo)記

(1) 使用完全培養(yǎng)基稀釋納米晶體，使最終OD值介于0.1至0.025之間。由于不同細(xì)胞適用納米晶體的最佳濃度不同，建議滴定法預(yù)實驗確定最佳濃度。

(2) 如果需要，使用0.2微米注射式濾器過濾標(biāo)記溶液。

(3) 取200微升標(biāo)記溶液代替培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基。

(4) 培養(yǎng)過夜至24小時。

(5) 除去標(biāo)記液，使用2毫升PBS洗滌三次。離心棄上清。

(6) 使用熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡檢測熒光標(biāo)記情況，然后進(jìn)行下一步實驗。

活體成像

(1) 麻醉動物。

(2) 尾靜脈注射納米晶體（主動靶向作用注射0.4nmol；被動靶向作用注射6nmol）。

(3) 成像系統(tǒng)鏡成像分析。

三 參考文獻(xiàn)

1. Jaiswal, J.K., Simon, S.M. 2007. Optical monitoring of single cells using quantum dots. Methods Mol Biol. 374:93-104.

2. Gao, X., Chung, L.W., Nie, S. 2007. Quantum dots for in vivo molecular and cellular imaging. Methods Mol Biol. 374:135-45.