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Premix型反轉(zhuǎn)錄試劑PrimeScript? RT Master Mix (Perfect Real Time)

貨號(hào)：RR036A發(fā)布時(shí)間：2023-08-16 15:48分享：

■ 制品內(nèi)容 (Code No.: RR036A: 10 μl反應(yīng)×200次量)

5X PrimeScript RT Master Mix (for Real Time)^*1	400 μl
RNase Free dH2O	1 ml ×2 支
EASY Dilution (for Real Time PCR)^*2	1 ml

1 含有PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、Random 6 mers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反應(yīng)Buffer (含有Mg²⁺) 。 2 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)梯度稀釋cDNA或RNA標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液。模板DNA或RNA如果用水或TE Buffer稀釋時(shí)，由于受Microtube吸附作用等的影響，往往不能準(zhǔn)確地進(jìn)行稀釋，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果精度降低。使用本制品時(shí)，即使稀釋至低濃度也能夠進(jìn)行準(zhǔn)確地稀釋，容易在寬廣范圍內(nèi)獲得準(zhǔn)確定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。本制品不影響反轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)，用其稀釋后的樣品可直接使用。EASY Dilution (for Real Time PCR) 也可以單獨(dú)購(gòu)買 (Code No.: 9160/9160Q)。注意：EASY Dilution請(qǐng)與本公司Real Time PCR試劑組合使用，對(duì)于其他公司的同類制品的適用性本公司尚未進(jìn)行確認(rèn)。

■ 制品說(shuō)明

本制品是2 Step Real Time RT-PCR用的理想反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)試劑。5×PrimeScript RT Master Mix中含有定量RT-PCR的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的所有試劑 (PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、Random 6 mers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反應(yīng)Buffer)，加入模板RNA和水即可迅速進(jìn)行反應(yīng)。使用具有較強(qiáng)延伸能力的PrimeScript RTase，與制品PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)(Code No.: RR037Q/A/B) 相同，可以在較短時(shí)間內(nèi)高效合成Real Time PCR用模板cDNA。本制品合成的cDNA可以用于嵌合法和探針?lè)╭PCR分析，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐cTB Green^? Premix Ex Taq^? II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)^* 、TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B)^* 和Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 等定量試劑配合使用，能夠進(jìn)行高性能的基因表達(dá)分析。

*：Takara嵌合法Real Time PCR（qPCR）產(chǎn)品的名稱從2017年12月下旬開始，將逐步變更為「TB Green系列」。產(chǎn)品Code、性能和原有產(chǎn)品相比沒(méi)有變化，請(qǐng)繼續(xù)放心使用。
產(chǎn)品名稱將隨新lot的產(chǎn)品逐步變更，產(chǎn)品網(wǎng)頁(yè)或操作說(shuō)明書可能會(huì)先于產(chǎn)品標(biāo)簽變更，望知悉！

■ 保存

-20℃。

■ 試劑盒特長(zhǎng)

1. 制品為預(yù)先混好的Premix形式，只需加入模板RNA和水便可以開始反應(yīng)。
2. 可以在較短時(shí)間內(nèi)高效合成Real Time PCR用cDNA，是進(jìn)行2 Step Real Time RT-PCR反應(yīng)的理想試劑。
3. 使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer 2種反轉(zhuǎn)錄引物，可以合成適合Real Time PCR用cDNA。
4. Real-time RT PCR定量需要建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的條件就是需要將總RNA和反轉(zhuǎn)錄cDNA稀釋到較低的濃度。如果用水或TE Buffer稀釋時(shí)，由于模板濃度低不穩(wěn)定，因而會(huì)縮小曲線范圍，結(jié)果準(zhǔn)確度降低。本制品中附加了標(biāo)準(zhǔn)曲線制作用稀釋液EASY Dilution (for Real Time PCR)，將Total RNA或cDNA稀釋至低濃度時(shí)也能夠進(jìn)行準(zhǔn)確稀釋，容易在寬廣范圍內(nèi)獲得準(zhǔn)確定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

■ 注意事項(xiàng)

1. 5X PrimeScript RT Master Mix在使用前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部。由于5X PrimeScript RT Master Mix粘度高，用移液槍慢慢反復(fù)吸打充分混勻后使用。
2. 分裝試劑時(shí)務(wù)必使用新的槍頭 (Tip)，以防止樣品間污染。
3. 本制品中已經(jīng)加入了反轉(zhuǎn)錄Primer（Oligo dT Primer 和Random 6 mers），如果要使用Gene Specific Primer進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，則不能使用本制品。

Technote：

An efficient method for quantification of human gene expression
levels using PrimeScript reverse transcriptase

Monitoring siRNA knockdown: Quantifying transient knockdown of
LEDGF/p75 in docetaxel-resistant prostate cancer PC-3-DR cells

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