如何選擇合適的熒光
? 必須能夠被流式細(xì)胞儀上所配備的激光器所激發(fā)
? 激發(fā)的光譜必須在儀器上濾光片能夠接受的合適范圍內(nèi)
? 熒光染料光譜的重疊應(yīng)當(dāng)盡量減少
? 高表達(dá)量的抗原幾乎可以用任何熒光染料標(biāo)記抗體檢測(cè)，而較低表達(dá)的抗原則需要用較高S/N比值的熒光染料標(biāo)記的抗體檢測(cè)。常用熒光的強(qiáng)弱如下：PE>APC>PE-Cy7>Percy-Cy5.5>FITC>APC-Cy7。
? 檢測(cè)自發(fā)熒光水平高的細(xì)胞時(shí)，使用發(fā)射光波長較長的熒光染料（如APC），可以得到較好的S/N比值。
根據(jù)儀器選用熒光染料：
1、每個(gè)人通道只能選擇一種熒光染料；
2、各個(gè)通道之間的熒光染料可以隨意搭配，搭配的熒光染料之間發(fā)射光譜重疊盡量小。
| 激發(fā)光波長 | 通道 | 熒光染料 |
| 488nm | FL1 | FITC\GFP\Alexa Fluar488\Bidipy\Fluo-3 |
| FL2 | PE\Propidium Iodide(PI) | |
| FL3 | PerCP\ PerCP-Cy5.5\PE-Cy5\PE-Cy5.5\PE-Teses Red\7-AAD | |
| FL4 | PE-Cy7\PE-Alexa Flour750 | |
| 633nm | FL5 | APC\Cy5\Alexa Fluor647\Alexa Fluor660\ Alexa Fluor700 |
| FL6 | APC-Cy7\APC-Alexa Flour750 | |
| 375nm | FL7 | Hoechsr33342-Blue\DAPI |
| FL8 | Hoechsr33342-Red | |
| 405nm | FL9 | Parific Blue\Cascade Blue\Alexa Flour 405 |
| FL10 | Parific orange |
不同的流式細(xì)胞儀可選的熒光染料
做多色實(shí)驗(yàn)，使用熒光染料多，可以登陸eBioscience網(wǎng)站http://www.ebioscience.com/resources/fluorplan-spectra-viewer.htm，借助FluorPlanSpectra Viewer 進(jìn)行熒染料光選擇，減少熒光疊加現(xiàn)象，便于后期數(shù)據(jù)分析。
熒光補(bǔ)償
? 熒光溢漏：當(dāng)一個(gè)熒光經(jīng)過激光之后，激發(fā)發(fā)射光及發(fā)射波長，而各個(gè)熒光發(fā)射光之間有一定的重疊，會(huì)溢漏一部分的熒光到其他鄰近的通道里。
? 熒光補(bǔ)償：如果我們要檢測(cè)一個(gè)通道的信號(hào)的時(shí)候必須要將其他通道溢漏過來的光減掉，才能檢測(cè)到目標(biāo)通道的真正信號(hào)，而這個(gè)糾正熒光溢漏的過程就是我們所說的熒光補(bǔ)償。
? 熒光補(bǔ)償和熒光染料本身的特質(zhì)有關(guān)，和PMT有關(guān)。為了減少溢漏值，可以增加主通道的PMT電壓，或者減少被溢漏通道的PMT電壓。
