是不是細胞污染？是哪種細胞污染？如何識別？

細菌污染

細胞中如果污染細菌，最常見的有枯草桿菌等革蘭陽性菌以及大腸桿菌、假單孢菌等革蘭陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見。培養(yǎng)細胞受細菌污染后，會很快出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH 改變。

也有少數(shù)培養(yǎng)液肉眼觀察無多少改變，只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染。所以，每天應仔細觀察。污染后細胞發(fā)生病理改變，胞內顆粒增多、增粗，最后變圓脫落死亡，造成實驗失敗和細胞株(系)丟失。

細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。

如何預防

●仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠、壓力足夠。

●重點檢查和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意。

●下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象，可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理。

白色念球菌污染

革蘭氏染色陽性，中間長梭型的是正在分裂的念珠菌

霉菌污染

霉菌污染以后，培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37 度孵箱培養(yǎng) 2-3 天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質。鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態(tài)變差。

用硫酸銅溶液擦拭 CO2 孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體, 可以防止霉菌污染。

CO2 孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2 月左右），尤其在多雨的季節(jié)。

其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用 84 液擦洗－清水擦洗－75% 酒精擦洗－紫外燈照。

如何預防

●可在培養(yǎng)基里加 3u/mL 的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素 D 或雙抗。

●細胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線菌素 D 或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞。

●將環(huán)境徹底消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。

內皮細胞培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)的一個霉菌

霉菌污染

上圖是典型的霉菌污染，肉眼看到白色的團塊或白點，鏡下呈絲狀。400 倍圖片如上。

支原體污染

支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。培養(yǎng)液一般會渾濁。

國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去?？捎锰肪亍F用支原體病的藥，無任何不良反應。如果用的是 Sigma 公司的，使用時用 50u g/mL Tylosin 培養(yǎng)液培養(yǎng) 6 天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用 8 ug/mL 的濃度。

支原體污染

支原體污染電鏡照片，煎蛋狀和其他形狀

真菌污染

一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。

真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。

真菌污染

高倍鏡下的真菌污染

原蟲污染

培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細胞占優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長，最終形成惡性循環(huán)。

污染的可能原因：配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等。

關于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細胞），37 度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長 就是操作的問題。也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。

如何預防

●孵箱應定期用三氧機消毒或者紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱，同時孵箱內的水應是三蒸水。

●超凈臺、取材、器材、培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶、操作等因素

●超凈臺的風機不能過大，風機到 6-8 格。否則也可能能致霉菌污染。

●無菌室經甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。

摘自：生物學霸